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技術(shù)文章

牛白細胞介素-18(IL-18)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

點(diǎn)擊次數:14070   發(fā)布時(shí)間:2023/8/22 9:41:26

 

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:                                                           96T

3ng/L -100 ng/L

 

 

使用目的:

本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細胞介素-18IL-18)含量。

實(shí)驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本牛白細胞介素-18IL-18水平。用純化的牛白細胞介素-18IL-18抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素-18IL-18,再與HRP標記的白細胞介素-18IL-18抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過(guò)che底洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素-18IL-18呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度(OD值),通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品牛白細胞介素-18IL-18濃度。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(200 ng/L

0.5ml×1

3

標包被

12孔×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說(shuō)明書(shū)

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2張  

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1個(gè)

標本要求 

1.標本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻進(jìn)行,提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢,用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

100ng/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

50ng/L

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

25ng/L

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

12.5ng/L

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

6.25ng/L

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

 

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白孔調零,450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

原創(chuàng )作者:上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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