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技術(shù)文章

免疫組化中抗體選擇要求

點(diǎn)擊次數:11601   發(fā)布時(shí)間:2024/4/26 10:22:36

1、一抗選擇

(1)選擇單克隆還是多克隆抗體。


      由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體,單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結合,就像導彈精-確地命中目標一樣。另一方面,即使是同一個(gè)抗原決定簇,在機體內也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱(chēng)為多克隆抗體。在抗原抗體反應中,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對較小,檢測抗原靈敏度相對較低,而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現非特異性染色(可以通過(guò)封閉等避免)。

(2)種屬來(lái)源。


      家兔來(lái)源的抗體多是多克隆,而小鼠來(lái)源的抗體多是單克隆,但也有例外。根據此來(lái)源選擇相應的二抗。


(3)種屬反應性的選擇。

 
      這一點(diǎn)很重要,表明這種抗體可能存在種屬差異,且這種抗體適合檢測哪種種屬動(dòng)物體內的抗原。


(4)能否做免疫組化。


      一抗說(shuō)明書(shū)都會(huì )注明做WB、IHC、ICC、IF等,建議選擇注明的抗體(經(jīng)過(guò)文章證明)。

(5)檢測標本類(lèi)型。


       用于檢測石蠟切片還是冰凍切片,一般能做石蠟切片的抗體,都可用來(lái)檢測冰凍切片,但能做冰凍切片的抗體,不一定能檢測石蠟切片中的抗原。

2、二抗選擇


(1)種屬來(lái)源。

 
      主要根據一抗種屬來(lái)源來(lái)決定購買(mǎi)二抗來(lái)源,如一抗是小鼠來(lái)源,那二抗就買(mǎi)抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。

(2)標記物的選擇。


      有HRP、Biotin、熒光素等標記物,一般SP三步法二抗選擇Biotin標記為二抗,與后面的SP結合反應;而免疫熒光染色就需要購買(mǎi)不同熒光素標記的二抗,如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。(這主要與后面有無(wú)三抗和三抗種類(lèi)有關(guān))。

(3)選擇IgM還是IgG。


     一抗是IgM,二抗就選擇IgM;反之,一抗是IgG,則二抗選擇IgG。

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